Fundamento y Aplicaciones del Análisis por Cromatografía de Líquidos (HPLC)

OBJETIVO:

Con este curso se  pretende familiarizar al participante en conocimientos de cromatografía de líquidos, como principios de cromatografía, parámetros cromatográficos,  mecanismos de detección,  selección de columnas y las buenas prácticas de operación del instrumento, así como los procesos de validación de métodos analíticos, calibración y calificación en el HPLC-UPLC, para asegurar el propósito de los métodos de análisis.

TEMARIO:

1. Principios generales de cromatografía

• Clasificación de la cromatografía
• Mecanismos de separación cromatográfica (fase reversa y fase normal)
• Principios del análisis instrumental por cromatografía de líquidos HPLC-UPLC
• Mecanismos de detección (UV, Arreglo de diodos, IR, Electroquímicos, MS, etc.)

2. Componentes de la instrumentación analítica HPLC

• Automuestreadores
• Sistema de bombeo (recomendaciones en la preparación de fases móviles, purga del sistema de bombeo, fase reversa y fase normal)
• Columnas  cromatográficas (clasificación y selección de columnas  cromatográficas  en función de su polaridad, longitud, diámetro, tamaño de partícula, etc.)
• Detectores. Selectividad, sensibilidad y rango dinámico (UV, Arreglo de diodos, IR, Electroquímicos, MS, etc.)

3. Parámetros cromatográficos

• Aplicación, interpretación y cálculo de los parámetros cromatográficos  (Volumen muerto, platos teóricos, k prima, resolución, selectividad, factor de coleo o simetría)

4. Desarrollo e implementación de métodos analíticos

• Métodos normalizados (EPA, STMD, USP, EP, etc.) para evaluaciones cualitativas y cuantitativas (pureza e impurezas)
• Condiciones de operación (Flujos, columnas, temperatura, longitudes de onda, etc.)
• Selección de columnas cromatográficas
• Desarrollo de métodos analíticos

5. Análisis cuantitativo en la cromatografía de líquidos

• Evaluación  en % de señal/respuesta (Áreas o alturas del pico cromatográfico)
• Evaluación de señal por estándar externo (calculo por corrección de dilución, base  seca, etc.)
• Evaluación de señal por estándar interno (calculo por corrección de dilución, base seca, etc.)

6. Software de operación y adquisición de datos en un HPLC

• Softwares operacionales (Turbochrom y Totalchrom Perkin-Elmer, Star y Galaxi Varian, Chemstation-Chemstore Agilent, Millenium/ Empower Waters, EZCHROM, etc.)

• Condiciones de operación (adquisión de datos y/u operación)
• Parámetros de integración de picos cromatográficos (anchos de picos, señal/ruido, umbral, eventos de integración, etc.)
• Calculo de contenidos por estándar interno y estándar, haciendo uso del software (curvas de calibración).

7. Transferencia de métodos analíticos HPLC-UPLC/UHPLC

• aplicaciones de métodos de cromatografia de líquidos de ultra desempeño
• transferencia de métodos de HPLC A UPLC
• mecánica de fluidos en sistemas UPLC/UHPLC

8. Detección lógica de fallas en un HPLC

• Lineamientos en el diagnóstico de fallas
• Casos prácticos
• Administración de riesgos
• Mantenimiento preventivo y correctivo

9. Calibración y calificación

• Calificación del diseño, instalación, operación y desempeño.
• Materiales de referencia y patrones de calibración para el sistema HPLC
• Diseño de experimentos para la calibración y/o calificación del HPLC

10. Validación de métodos analíticos por HPLC

• Propósito del método analítico (Pureza, impurezas, identidad)
• Parámetros de desempeño:

• Exactitud (Factor respuesta, recobro, inferencia)
• Precisión (Repetibilidad, reproducibilidad y precisión intermedia)
• Especificidad (Resolución, selectividad,  pureza espectral)
• Linealidad (Curva de calibración),   

• Límites de detección y cuantificación (Evaluación de la señal/ruido)
• Metodología (Diseño de experimentos)
• Criterios  de aceptación  (Quimiometría y estadística para la evaluación de los parámetros de desempeño)
• System Suitability (Adecuabilidad del sistema)

INSCRIPCIONES E INFORMES: rosario.murillo@grupoidaii.com / 01 (272) 727 1839